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    羊 孕 酮(PROG) 酶 聯 免 疫 分 析

    發布時間:2019/8/5 點擊量:1408

    羊 孕 酮(PROG) 酶 聯 免 疫 分 析 試 劑 盒
    使 用 說 明 書
    本試劑盒僅供研究使用。
    檢 測 范 圍 : 96T
    35pmol/L -1400 pmol/L
    使 用 目 的 :
    本試劑盒用于測定羊血清、血漿及相關液體樣本中孕酮(PROG)含量。
    實 驗 原 理
    本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中羊孕酮(PROG)水平。用純化的羊孕酮(PROG)抗
    體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入孕酮(PROG),再與 HRP 標記
    的孕酮(PROG)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過*洗滌后加底物 TMB 顯
    色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺
    和樣品中的孕酮(PROG)呈正相關。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度(OD 值),通過標
    準曲線計算樣品中羊孕酮(PROG)濃度。
    試 劑 盒 組 成
    1 30 倍濃縮洗滌液 20ml×1 瓶 7 終止液 6ml×1 瓶
    2 酶標試劑 6ml×1 瓶 8 標準品(2400pmol/L) 0.5ml×1 瓶
    3 酶標包被板 12 孔×8 條 9 標準品稀釋液 1.5ml×1 瓶
    4 樣品稀釋液 6ml×1 瓶 10 說明書 1 份
    5 顯色劑 A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 張
    6 顯色劑 B 液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 個
    標 本 要 求
    1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能
    馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融
    2.不能檢測含 NaN3 的樣品,因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
    操 作 步 驟
    1. 標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀
    釋。
    1200 pmol/L 5 號標準品 150µl 的原倍標準品加入 150µl 標準品稀釋液
    600 pmol/L 4 號標準品 150µl 的 5 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液
    300 pmol/L 3 號標準品 150µl 的 4 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液
    150 pmol/L 2 號標準品 150µl 的 3 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液
    75 pmol/L 1 號標準品 150µl 的 2 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液
    2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、
    待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣 50µl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl,
    然后再加待測樣品 10µl(樣品終稀釋度為 5 倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡
    量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
    3. 溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。
    4. 配液:將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
    5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此
    重復 5 次,拍干。
    6. 加酶:每孔加入酶標試劑 50µl,空白孔除外。
    7. 溫育:操作同 3。
    8. 洗滌:操作同 5。
    9. 顯色:每孔先加入顯色劑 A50µl,再加入顯色劑 B50µl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色
    10 分鐘.
    10. 終止:每孔加終止液 50µl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
    11. 測定:以空白空調零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。 測定應在加終止
    液后 15 分鐘以內進行。


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